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植物高爾基體提取試劑盒（酶法）
植物高爾基體提取試劑盒
試劑盒儲存條件：
【注】：2-8℃ 保存。
試劑瓶開蓋后各組份按要求條件保存。
拆封后請盡快使用完!
試劑盒組成：
產(chǎn)品組成 組份編號 有效期：
規(guī)格 50T 100T
試劑
A：高爾基體提取液A 50ml 100ml 36042A
試劑
B：高爾基體提取液B 25ml 50ml 36042B
試劑
C：試劑WT 1ml 1ml 36042C
試劑
D：高爾基體保存液D 10ml 20ml 36042D
使用說明書一年。
植物高爾基體提取試劑盒-非酶法
【注】：
有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
試劑拆封后請盡快使用完!
注意事項：
1.正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。
2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3.禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4.樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
5.最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6.實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。
產(chǎn)品簡介：
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應用。
除了高爾基體提取試劑盒，還有細胞核提取、線粒體提取等各種亞細胞結(jié)構(gòu)的提取試劑盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基
體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應用。
除了高爾基體提取試劑盒，還有細胞核提取、線粒體提取等各種亞細胞結(jié)構(gòu)的提取試劑
盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。
儀器：
離心機
振蕩器
渦旋混勻器
Dounce勻漿器
移液器
冰箱
冰盒
試劑：PBS (pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)
耗材：
離心管
吸頭
手套
植物高爾基體提取試劑盒（酶法）
使用方法：
使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高 爾基體回收率會下降。 離心機轉(zhuǎn)速有相對離心力(RCF，×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(RPM，r/min)兩種表示方式，有些離心機 設(shè)置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算： g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單 位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對離心力(RCF，×g)為 =10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
1. 取 200-500 mg 新鮮植物葉片組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。
2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。
植物高爾基體提取試劑盒-酶法
【注】：
也可用刀片將葉片樣本切成小塊。
3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。
4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 次。
【注】：
每上下一個來回為一次。
也可以用電動勻漿機充分勻漿。
5. 將勻漿液在 4℃，1000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
6. 將上清在 4℃，3000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
7. 將上清在 4℃，6000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 在上清中加入 10ul 試劑WT，在 4℃，50000g 力條件下離心 20 分鐘。
【注】：
沒有 50000g 離心條件，可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會下降。
9. 棄上清，在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，混勻。
10. 在 4℃，50000g 力條件下離心 30 分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：
沒有 50000g 離心條件，可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會下降。
11. 沉淀用高爾基體保存液重懸保存或直接用于下游實驗應用。
【注】：
可以不用試劑盒中提供的保存液。
根據(jù)實驗需要用自己的其他緩沖液保存或直接用于下游實驗
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