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小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-9437 小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法原理，專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的濃度?。LBP作為急性期蛋白，在炎癥反應(yīng)中具有雙重調(diào)控作用，其檢測對研究免疫防御機(jī)制及病理過程具有重要意義?。
二、實(shí)驗(yàn)原理
捕獲抗體包被?：抗小鼠LBP單抗體預(yù)包被于微孔板形成固相載體?。
抗原-抗體復(fù)合物形成?：樣本中LBP與捕獲抗體結(jié)合，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體形成"三明治"結(jié)構(gòu)?。
信號放大?：加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合實(shí)現(xiàn)信號放大?。
顯色檢測?：TMB底物顯色后，通過450nm波長測定吸光度值，濃度與OD值呈正相關(guān)?。
三、試劑盒組分
| 組分 | 規(guī)格(96T) | 保存條件 |
| 預(yù)包被酶標(biāo)板 | 8×12條 | 2-8℃ |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 6濃度梯度 | -20℃ |
| 生物素標(biāo)記抗體 | 120μL | -20℃ |
| 酶標(biāo)復(fù)合物 | 12mL | 2-8℃ |
| TMB顯色液 | A/B液各6mL | 2-8℃避光 |
| 終止液 | 12mL | 室溫 |
| 濃縮洗滌液 | 60mL | 室溫 |
四、樣本處理
血清/血漿?：
血清：室溫靜置30min，2000×g離心15min，避免溶血?。
血漿：EDTA抗凝，3000×g離心20min，去除血小板。
組織樣本?：
稱取100mg組織，加入1mL PBS勻漿，反復(fù)凍融3次裂解細(xì)胞?。
12000×g離心10min取上清。
細(xì)胞上清?：
離心去除細(xì)胞碎片，上清液直接檢測或凍存?。
保存條件?：
短期：2-8℃(≤48h)
長期：-20℃(≤1月)或-80℃(≤3月)，避免反復(fù)凍融?。
五、操作流程
試劑準(zhǔn)備?：
濃縮洗滌液按1:20稀釋(示例：1mL濃縮液+19mL蒸餾水)?。
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取6支EP管，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μL，倍比稀釋?。
加樣反應(yīng)?：
每孔加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品50μL，空白孔不加。
37℃孵育60min，洗滌5次(每次靜置1min)。
檢測步驟?：
加入生物素標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育30min。
加入酶標(biāo)復(fù)合物100μL，37℃避光孵育20min。
加入TMB底物100μL，避光顯色15min。
加入終止液50μL終止反應(yīng)。
讀數(shù)?：
450nm波長測定OD值，參考630nm校正值?。
六、結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度對數(shù)為橫軸，OD值為縱軸繪制四參數(shù)擬合曲線?。
樣本計(jì)算?：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程計(jì)算樣本濃度，乘以稀釋倍數(shù)?。
檢測范圍?：0.156-10ng/mL(實(shí)際以說明書為準(zhǔn))?。
靈敏度?：低檢測限≤0.078ng/mL?。
七、注意事項(xiàng)
樣本處理?：
避免使用溶血、高血脂樣本?。
組織樣本需去除污漬?。
操作規(guī)范?：
加樣時(shí)避免觸及孔壁，保持槍頭垂直?。
洗滌需凈，殘留液體會導(dǎo)致假陽性。
試劑保存?：
TMB顯色液需避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。
酶標(biāo)板拆封后需密封防潮?。
質(zhì)量控制?：
建議設(shè)置復(fù)孔檢測，CV值應(yīng)<15%?。
標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值需≥0.99?。
八、常見問題處理
| 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方案 |
| 陰性對照OD值偏高 | 洗滌不凈/樣本污染 | 增加洗滌次數(shù)/更換樣本? |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤 | 重新配制標(biāo)準(zhǔn)品? |
| 重復(fù)性差 | 加樣不均/孵育時(shí)間不一致 | 使用多道移液器/同步計(jì)時(shí)? |
| 顯色過快/過慢 | 室溫波動/底物失效 | 控制環(huán)境溫度/更換底物 |
九、安全聲明
本試劑含疊氮鈉(NaN?)，避免接觸皮膚或吸入?。
終止液含強(qiáng)酸，操作時(shí)佩戴防護(hù)手套?。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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